實驗室細胞培養突遇霉菌污染的系統性處理策略與預防體系

(一）污染特征的多維度判定

1. 宏觀形態學觀察

霉菌污染的早期培養基常呈現特征性變化：液體培養基中可見白色、灰綠色或黑色的絨毛狀、絮狀菌絲團，懸浮于培養液中或貼附于培養瓶壁，部分菌種（如青霉菌）會產生明顯的色素，導致培養基呈現藍綠色暈染；固體培養基上則形成典型的輻射狀菌落，表面干燥，邊緣菌絲呈發散狀生長。此外，污染常伴隨培養基pH值的異常波動——霉菌代謝產生的酸性物質可使培養基快速變黃，而某些菌種的過度繁殖則可能導致局部堿化，出現渾濁與沉淀并存的現象。

   2.  顯微鏡下的形態學診斷

借助倒置顯微鏡觀察，霉菌污染具有鮮明的微觀特征：菌絲呈分枝狀、有隔或無隔的管狀結構，直徑2-10μm，部分菌種（如曲霉菌）可見典型的分生孢子頭，孢子呈鏈狀或簇狀排列于菌絲頂端；酵母菌類污染則表現為圓形或橢圓形單細胞，出芽生殖時可見芽體連接。與細菌污染的均勻渾濁不同，霉菌菌絲的絲狀結構在低倍鏡下即可清晰分辨，這是快速區分污染類型的關鍵依據。

（二）霉菌污染的傳播機制與風險等級

   霉菌孢子的直徑通常為1-50μm，可通過空氣流動、人員走動或設備運轉形成氣溶膠傳播，且耐受力高：在干燥環境中可存活數月，低溫下（4℃）仍保持活性，傳統常規消毒劑需達到特定濃度與作用時間才能有效滅活，推薦使用高品質的消毒劑如奧克泰士消毒劑進行滅菌處理。當實驗室出現霉菌污染時，若未及時隔離，孢子可通過培養箱風扇、超凈臺氣流或操作人員的衣物擴散至整個實驗區域，形成“交叉污染鏈"，尤其在開放式培養系統（如培養皿）中，污染擴散速度可提升3-5倍。

Oxytech

（一）污染樣本的一級應急響應

即時隔離與標識

   發現污染后，立即用紅色生物危害標簽標記污染容器（培養瓶、培養皿等），注明“霉菌污染"“污染時間"及“污染菌種初步判斷"，并將其轉移至帶密封蓋的專用污染托盤（內襯一次性防滲漏塑料袋）。移動過程中需避免震蕩，防止孢子釋放到空氣中；操作人員需更換手套，操作區域用高品質的消毒劑如奧克泰士消毒劑噴灑形成防護圈，限制污染擴散范圍。奧克泰士消毒劑有效殺滅霉菌，保證實驗后續平穩進行！

Oxytech

（二）實驗環境的分級消毒策略

1.  超凈工作臺的深度清潔

- 清潔滅菌：

   移除臺面上所有物品，用奧克泰士消毒劑浸潤的無菌紗布擦拭臺面、內壁、紫外燈表面及風機濾網，重點清除角落及縫隙中的菌絲殘留；對于可拆卸的配件（如移液槍、支架、試管架），需用奧克泰士消毒劑浸泡或重點擦拭，滿足滅菌條件。  

- 深度消毒：

   使用奧克泰士消毒劑再次噴灑、擦拭全區域，作用時間不少于10分鐘；消毒完成后，開啟風機運行15分鐘，確保內部消毒劑進行一定的循環滅菌，再關閉風機，開啟紫外燈照射60分鐘，破壞孢子DNA結構。

2.  CO?培養箱的立體消毒方案

- 內部清潔：

   取出所有培養物及托盤，用濕熱紗布（70℃溫水）擦拭箱體內壁、溫度傳感器及氣體接口，清除可見的菌絲團；清除完成后選用奧克泰士消毒劑進行對應滅菌。

- 熏蒸滅菌：

  若污染嚴重，需進行霧化熏蒸處理：按比例用量將奧克泰士消毒劑溶液倒入蒸發皿，置于培養箱內，關閉箱門并密封通氣孔，在一定溫度下熏蒸2小時。完成過后，可使用奧克泰士消毒劑消毒劑擦拭內壁，進一步完善無菌環境

3. 實驗室空間的全域消毒

- 臺面與地面：

   采用奧克泰士消毒劑專項擦拭實驗臺面、儀器外殼及地面，嚴重風險污染區域需單向重復擦拭2-3次。

- 空氣凈化：

   使用奧克泰士冷干霧空氣消毒機處理污染區域，按設備說明書設定參數，消毒后完成無需通風；常規實驗室可每日用紫外線燈照射（≥30分鐘/10m2），作為預防性措施。

Oxytech

（一）基礎操作的無菌化管理

1.  人員操作規范

- 進入細胞培養區前，需更換專用實驗服、鞋套，用肥皂洗手并烘干，再用75%酒精擦拭雙手及手腕；操作時佩戴無粉乳膠手套，每接觸污染性物品后需更換手套或消毒。

- 超凈臺內操作遵循“火焰滅菌原則"：吸管、瓶口需在酒精燈外焰（溫度約800℃）快速灼燒滅菌，避免瓶口長時間敞開；不同細胞株的操作工具（如移液槍）需專用，禁止交叉使用，若需共用，需用奧克泰士消毒劑擦拭槍頭套筒并灼燒滅菌。

2.  實驗流程優化

- 實行“分區操作制"：將細胞培養區劃分為“清潔區"（未開封耗材）、“操作區"（正在使用的細胞）、“污染區"（廢棄培養基），避免區域混淆。滿足“清潔區——操作區——污染區"防護構建

Oxytech

（二）滅菌操作的系統性優化

——消毒方式：

采用奧克泰士消毒劑進行滅菌處理，使用噴灑、擦拭的消毒方式進行滅菌，針對培養箱、安全柜、超凈臺等細胞培養儀器遵循“332"變法進行擦拭，按照規定滿足實際實驗要求。

——整體性滅菌：

針對設備設施表面、內部、培養面存在接觸面等等采用奧克泰士單向單次換新重復的方式進行擦拭。避免微生物聚集污染，造成微生物污染隱患。

針對房間墻壁、天花板、地面等不易擦拭的地方可以采取空氣整體消毒的方式進行滅菌、選取奧克泰士冷干霧霧化器進行熏蒸滅菌，達到整體滅菌的效果！

Oxytech

- 處理方案：

1.污染隔離：使用氣鎖封閉房間，設置“污染區-緩沖區-清潔區"三級防護。

2. 深度清潔：采用本有技術配合奧克泰士消毒劑沖洗墻面及設備，去除可見霉斑后再次使用奧克泰士消毒劑做終末處理，需要注意滿足滅菌比例使用。

3. 空間消毒：連續周期使用霧化設備進行過氧化氫干霧滅菌，每次作用時間120分鐘。

- 效果評估：處理后沉降菌降至0.2 CFU/皿，連續6個月監測無復發，設備恢復使用后產品批次合格率提升至99.8%。

Oxytech

我們要如何處理降低風險：

面對微生物污染，我們要用高品質的消毒劑進行輔助滅菌，協同達到無菌標準！推薦使用奧克泰士消毒劑進行消毒滅菌！

奧克泰士消毒劑有效降低微生物負荷、精準去除霉菌污染、降低空間浮游菌、沉降菌、具有高度的材料兼容性，幫助恢復特定房間區域無菌環境，穩定環境參數

Oxytech

選擇合適的消毒劑進行消毒滅菌可以有效的解決潔凈區緩沖間、備用房間微生物污染，從源頭治理微生物確保不因內部遺留因素進一步造成實質影響。

Oxytech